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                    全自動生化分析儀試劑存在的問題及解決方法
                    時間:2016-06-22   瀏覽:1347次

                    目前生化試劑種類繁多,如何正確合理的使用,充分提高檢驗結果的準確性,以便更好的為臨床診斷服務。

                     

                    1、優質的儀器用水

                        優質的儀器用水是使用好檢驗試劑的一個十分重要環節之一。因為測定離子類的項目:比如銅、鐵、鋅、鈣、Mg、磷。這些項目在使用過程中,儀器用水的質量相當重要,雖然現在一般醫院的生化儀都帶有制水系統,但制水系統基本都是制備去離子水,離子交換樹脂在使用一段時間后交換能力明顯下降,需要定期進行更換,否則制備的水離子含量多,電導率偏高。使用含離子超標的水沖洗儀器,直接影響檢驗結果。再如血氨、二氧化碳項目,如果水質不好,儀器用水中本身含氨和二氧化碳就很高,則檢測該項目的結果也會受到嚴重的影響。還有如果血清中含有GLDH,而儀器用水存在氨時,可消耗NADH,使利用NADH的酶聯連續監測法結果偏高。解決辦法:定期監測水質,當儀器用水的電阻小于1.0MQ時要更換離子交換樹脂或活性炭。

                     

                    2、標本的及時分離及測定

                        標本的及時分離及測定是用好檢驗試劑的首要環節因為凡是利用NADH轉化為NAD+變化率來檢測其物質含量的試驗都或多或少受到血液存放時間的影響。原因是全血存放時間越長,紅細胞利用血清中的糖進行無氧酵解產生丙酮酸,丙酮酸使NADH轉化為NAD+,這樣使測定結果假性升高。解決辦法:①作好與臨床的溝通,對抽血人員和標本運送人員(傳遞人員)進行培訓;②及時分離血清并及時檢測;③也可將全自動生化分析儀上的延遲時間設置大于60秒,這樣試劑在延遲期內消除丙酮酸的干擾,可完全避免假陽性結果的出現。

                     

                    3、交叉污染

                        3.1生化分析儀本身的清洗問題造成的交叉污染在使用全自動生化分析儀時,儀器的交叉污染現象是引起實驗結果偏離的一個原因。由于全自動生化分析儀試劑針需要接觸各種試劑,一般難以徹底清洗干凈,所以容易造成分析項目的攜帶污染.而生化項目的測定往往僅需要幾微升樣本,試劑往往需要幾百微升,尤其在沒有自動沖洗程序的流動池式生化分析儀上,由于前帶現象的存在,如果前一個樣本為高值樣本,則接后的第一個低值標本結果應慎重報告。不僅沒有沖洗程序的生化分析儀器上有這種現象,就是具有自動沖洗程序的全自動生化分析儀也有交叉污染,例如Beckman全自動生化分析儀CX4,它的試劑吸針(Probe)、樣品吸針及反應攪拌棒是利用高壓沖洗液沖洗,然后用高壓壓縮空氣吹干,有時由于洗液壓力和壓縮空氣的壓力偏低,使試劑吸針、樣品吸針及反應混勻棒沖不干凈、吹不干,從而導致反應池之間相互污染、試劑間交叉污染,使檢驗結果偏離。另一個值得注意的問題是許多生化儀器由于長期頻繁的利用,使加樣針和試劑針的注射器磨損加重或注射器的"特氟龍"吸頭不及時更換,使吸樣針或試劑針密封層增大,產生泄漏現象也是造成樣本間及試劑間相互污染的一個重要原因。試劑吸樣或樣品吸樣不準確,通常導致利用速率法測試的標本系統偏低或偏高。眾所周知,速率法計算因子是由加樣體積和試劑體積參與確定的,如果加樣體積或加試劑體積不準,導致真正速率計算因子和理論計算因子偏離,從而使檢測結果不準確。解決辦法:①定期進行儀器維護保養;②按要求及時更換零部件;③定期對儀器進行校準;④全自動生化分析標本和試劑用量少,殘存少量即會影響測試結果,每天應用無水乙醇擦洗并定期更換干燥棒,保證比色杯清洗后不留殘液,避免比色杯的交叉污染。

                        3.2檢驗項目間的交叉污染在全自動生化分析儀的使用中,我們發現一個項目會影響緊隨其后項目的測試結果,造成這種影響的原因之一是一種試劑中含有另一試驗的測定物質而直接干擾其測試結果。原因之二是一種試劑中含有改變另一試驗反應條件或影響其反應進程的物質而間接干擾其測試結果。比如:在TP試劑中含有大量的CuSO4,如果將Cu放在TP項目的后面檢測,會使檢測結果偏高或重復性差。再如P放在含有磷酸鹽的項目后面,TBA放在含有膽酸鹽的項目后面都會使檢測結果偏高或重復性差。GLU放在CK和CK-MB的項目后面可能會使檢測結果偏高或重復性差。LDH放在ALT和AST的項目后面可能會使檢測結果偏高或重復性差。Mg放在ALP等含有鎂離子項目后面可能會使檢測結果偏高或重復性差。Ca放在a-Amy項目后面可能會使檢測結果偏高或重復性差。Mg試劑(CALMAGITE法)中含有EGTA,會干擾Ca的測定結果。另外我們發現相鄰兩個項目的PH值相差太大或反應對PH要求嚴格的項目,也會對測定的結果產生影響,比如TP和Alb之間PH相差較大,會互相干擾,TBA放在Alb后面測定,會使測定結果偏低等等。解決辦法:①調整實驗的前后順序來消除這種影響;②在造成污染的項目和受污染的項目之間設置清洗劑并設定進行清洗的次數。  

                    4、正確的參數設置也是用好檢驗試劑的一個關鍵因素

                        現代化分析儀上通常有分析程序供用戶設定,包括樣品量、試劑量、波長、分析方式和延遲時間、測試時間的設定等。下面我們就延遲時間和加樣程序的設定來說明正確使用分析參數對于正確運用試劑的作用。比如肌酐苦味酸測定法,我們在設定延遲時間時應注意到苦味酸在堿性條件下50秒前首先快速與如乙酰乙酸等快反應物質產生紅色化合物,而在120秒后堿性苦味酸又能與慢反應物質產生陽性干擾,解決辦法:最好設定延遲時間為50~60秒之間,測定時間小于60秒,這樣就充分消除了快反應和慢反應干擾,從而檢測到真正肌酐含量。

                     

                    5、校準液的正確使用

                        由于目前生產廠家提供的校準液并非通用的,只適用于某一特定的分析系統。同一項目不同方法學之間有很大差異,同一項目不同方法學的校準液更不能混用,但是在臨床檢驗中經常會發生膽紅素釩酸鹽法用重氮法的校準液校準,乳酸脫氫酶L-P法用P-L法校準液校準。TBA循環酶法用比色法校準液校準等都會造成測定結果不準確。另外同一方法學,不同廠家的校準品和試劑都會有所差異。解決辦法:①建議結合各實驗室條件選擇適合自已實驗室的校準品,如有條件可進行系統溯源;②建立滿足在同一方法學、同一測定條件、與理論計算的factor值差異不大,沒有發現有明顯影響因素,方可進行校正測定;③建立一個可靠的參考系統作為準確性基礎,然后將準確性轉移到"使用方法"測定中去,使"使用方法"測定結果可溯源到參考系統所提供的準確性基礎上來。在實現溯源性目標過程中,永遠以患者新鮮標本為實驗對象,以方法學對比試驗方法為驗證手段。采用回歸方程進行統計分析,斜率接近1,截距較小,說明"使用方法"對標本測定結果和溯源目標參考系統對標本檢測結果非常接近,檢測結果可靠。

                     

                    6、抗凝劑的使用

                        目前臨床上常用的抗凝劑有EDTA..2K、肝素、草氨酸鈉等,TBA和AFU不能用肝素抗凝劑,因為肝素會使TBA和AFU試劑發生混濁,導致吸光度假性偏高,從而使檢測結果偏高。解決辦法:①認真參閱試劑說明書;②作好與抽血人員之間的溝通和培訓,使抽血人員知道什么項目用何種標本。

                     

                    7、混成單一試劑的問題

                        比如酶法肌酐試劑,第一步R1中的酶要消除樣品中內源性肌酸的干擾,如果混成單一試劑,則會使檢測結果偏高,消除法HDL、LDL也不能混成單一試劑,因為它們都要分別清除HDL和LDL以外的脂蛋白,從而達到檢測的目的,如果混成單一試劑,則會使測定的HDL和LDL不準確。另外,有的試劑混成單一試劑后,穩定性和抗干擾能力也會明顯下降。解決辦法:①在儀器通道或試劑位允許的情況下盡量使用雙試劑;②如一定要使用單一試劑,最好選擇試劑廠家針對部份項目專門生產好的單一試劑。

                     

                    8、試劑開瓶的問題

                        隨著全自動生化分析儀的普及,"開瓶穩定性"也隨之受到了大家的重視,但是就目前有的試劑方法學來講,還達不到人們所要求的試劑開瓶后在儀器內放很長時間不需要定標,比如ALP、TP、GSP等PH為堿性的試劑,開瓶后試劑會吸收空氣中的二氧化碳,使試劑本身的PH值下降,如果長時間開瓶不定標或校準,會使檢測結果發生偏離,在國外有的項目有明文規定,必須72小時之內定標,比如BUN。但是在國內的某些實驗室為了方便,很長時間都不作校準,導致測定結果的不準確。解決辦法:了解試劑的特性,及時對部份項目進行校準,2.對于每天標本量不多的醫院,可按1~2天的用量取用試劑放入儀器。

                     

                    9、不同批號試劑相混的問題

                        目前將不同批號的試劑混合在一起使用的現象在檢驗中經常發生,當然這一方面是為了節省成本,另一方面為了方便。但是不管是什么品牌、什么試劑,由于不同批號的試劑生產時間不同,試劑中工具酶的活性會有差異,會發生水解的底物濃度隨時間長短也會不同。因此混在一起使用而又不定標,可能會導致檢測結果的不準確。還有如果有的試劑開瓶時間太長,空氣中的灰塵或細菌會進入瓶中,由于有的試劑含有大量的蛋白質和鹽,是細菌生長的最好條件,雖然有的試劑添加了防腐劑,但防腐劑的防腐也是有一定限度的,而且絕大多數廠家的試劑中是沒有加防霉劑的。解決辦法:①不同批號試劑建議不要混用,如果混用最好重新定標;②試劑瓶在儀器內使用時間不要過長,及時更換。③一般每個試劑瓶內由于試劑針不能吸完,或多或少都會留有幾毫升的試劑,如果是同一批號可以將未開瓶的同一批號試劑往里倒,但如果不是同一批號的試劑時倒入后最好定標,最好的做法是將每個批號的剩余試劑留起來待一定數量后混在一起,然后重新定標后檢測。

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